胚胎冷冻方法的程序化慢速冷冻细节

胚胎冷冻方法的程序化慢速冷冻，在冷冻前的平衡：细胞冷冻前的平衡直接关系到细胞的脱水情况，包括平衡时间和温度。平衡时间过短，脱水不充分，容易形成细胞内冰晶。通常平衡时间为：5～30分钟(取决于不同的试剂，温度为：4～5℃

③冰晶形成：温度下降到一定数值，液体将开始形成冰晶，这个温度数值称为冰点(freezing point)。冰晶由纯水构成，不含溶质。冰晶形成后释放出大量热量而引起温度的波动，影响胚胎的存活。在―5～一15℃，温度已降至冰点以下，而细胞外溶液仍未结冰的现象称超冷现象，此时细胞外渗透压不能随之升高，细胞不能脱水。为防止这种现象发生需要诱导：冰晶形成可以向液体中加入微量冰晶，但较少采用。较常用的是植冰(seeding),即自动或人工用预冷的金属棒在标本溶液冰点以下2～3℃时，瞬间地接触标本，可以激发溶液中许多小冰晶形成，随着冰晶的蔓延，热量得以缓慢释放，保证了冷冻时温度的线性下降，细胞也进入脱水阶段。常用的植冰温度为：―6～—8℃，主要采用人工植冰.

降温速率： 最常见的引起细胞损伤的因素，它决定了细胞受损的程度以及方式，细胞内冰晶形成主要是降温速率过快或复温效率过慢引起的，溶液效应主要是过慢降温产生的。