试管婴儿之精子准备和卵母细胞受精

第一   精子准备与评估在超净工作台（ClassⅡ生物安全柜）内进行精液操作；观察精液外观、液化、黏稠度、pH值。并取一滴在显微镜下检查精子密度形态和活力，记录于病历上；对精液正常者，取lML液化后的精液，加2mnl培养液混匀．200g离心10分钟，弃上清，保留沉淀，沿管壁缓慢加入2ml培养液，混匀后200g离心10分钟，弃上清，保留沉淀，上缓缓加入2ml培养液，置37℃5％CO培养箱中静置上游30～60分钟。吸取上游液至另一离心管中，混匀，计数精子密度、活力，待受精用，对少、弱、畸精标本及冷冻精子样本，将全部液化后精液与sm培养液充分混合，置入15ml离心管内，3009离心10分钟；弃上层悬液，吸出沉淀，重新用lm培养液悬浮沉淀，5009离心5分钟；弃上清，小心地加入100川培养液，置入M培养箱，37℃培养，备用；受精之前，取上层悬液一滴镜检；必要时可重新离心弃上清后，取沉淀进行ICSI

第二  卵母细胞体外受精在取卵4～6小时后进行；如果卵不成熟,受精时间可以延迟娄可以延迟数小时，授精浓度每个卵冠丘复合体约（1～2）X10条前向运动向运动精子；根据精子的活动力及形态以及沙发有精子聚集现象等调整受精溶度。受精时将合适数目的精子加入到含有COCs的培养皿中，然后放到培养箱。

受精检查：受精后｜6～20小时检查受精情况，机械法去除卵母细胞周围的颗粒细胞，将受精卵移至胚胎培养液微滴中，显微镜下观察，检查每个受精卵的原核数量和极体；正常受精应为两个原核、两个极体。