卵子冷冻技术之玻璃化冷冻原理

卵子冷冻技术除了慢速冷冻之外，还有一项技术就是玻璃化冷冻，他是一种快速冷冻方法，基本的原理是利用高溶度的渗透性冷冻保护剂和非渗透性保护剂蔗糖，经过急速降温使得脱水后样本残留的水分由液态转化为类似玻璃的非晶体化状态，在-196度的低温环境下降细胞或者组织固定在玻璃化状态，与慢速冷冻法的主要区别为玻璃化冷冻过程中卵子和其周围环境为类似玻璃态的结构而非冰晶状态。

在玻璃化冷冻过程中，常常都需要同时使用渗透性保护剂和非渗透性保护剂，组织细胞在相对较低溶度（1~2mol/L或者体积比15%）的渗透性冷冻保护剂中作用10-15min,可使得保护剂能够充分深入细胞内并慢慢的脱水，用来确保在冷存过程中胞内不会形成冰晶，再将卵子暴露在溶度相对较高（5-6mol/L或者体积比30%）的渗透性冷冻保护剂中，弱化水的结晶过程。同时细胞外非渗透性保护剂的溶度大约是0.5~1.0mol/L,可以提高细胞外渗透压，促进细胞脱水，避免细胞内的冰晶形成。玻璃化过程中高溶度保护剂的固化，形成无结构的玻璃态，进而有效的避免了细胞内冰晶形成而造成的机械性损伤。